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BS-2331 小鼠糖皮質(zhì)類固醇受體(GR)ELISA試劑盒
一、實驗原理
采用雙抗體夾心法檢測小鼠樣本中的GR蛋白濃度。將抗GR單抗包被于微孔板，加入樣本后形成抗原-抗體復(fù)合物，再與HRP標記的二抗結(jié)合，最終通過TMB底物顯色反應(yīng)定量分析。
二、試劑盒組成
組分規(guī)格保存條件
預(yù)包被微孔板96T/48T2-8℃避光
GR標準品6濃度梯度-20℃凍存
HRP標記檢測抗體1瓶2-8℃避光
TMB底物液A/B各1瓶2-8℃避光
注：不同批號試劑嚴禁混用
三、關(guān)鍵操作步驟
樣本處理
血清/血漿：離心后取上清，避免溶血
組織勻漿：按1:9比例加入裂解液，冰上超聲破碎
標準曲線制備
凍干標準品需用200μL標準品稀釋液復(fù)溶，靜置10分鐘后上下顛倒混勻15次
梯度稀釋時每次稀釋后需短暫離心，避免氣泡產(chǎn)生
孵育條件
37℃溫育90分鐘(每步加樣后輕拍板邊緣混勻)
洗滌液需現(xiàn)配現(xiàn)用，每次浸泡時間≤30秒
四、結(jié)果判定標準
有效性驗證
標準曲線R2≥0.99，最高濃度OD值在2.0-2.4之間
復(fù)孔變異系數(shù)(CV%)應(yīng)<15%
濃度計算
樣本OD值在標準曲線20%-80%范圍內(nèi)時可直接計算
超出范圍需重新稀釋
五、常見問題解決方案
現(xiàn)象可能原因處理措施
全板不顯色漏加HRP酶標抗體檢查加樣順序并重做
背景值過高洗滌不充分增加洗滌次數(shù)至5次
標準曲線非線性標準品溶解不均復(fù)溶后延長離心時間
注意：以上僅供參考，不作為實際數(shù)據(jù)，實驗需嚴格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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