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人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒的實驗使用說明書核心內容如下：
BS-0120人腫瘤壞死因子β(TNF-β)ELISA試劑盒
一、實驗原理?
采用?雙抗體夾心法?檢測TNF-β濃度：
包被抗體?：微孔板預包被抗人TNF-β單克隆抗體。
抗原結合?：樣本或標準品中的TNF-β與固相抗體結合，形成復合物。
酶標抗體反應?：加入HRP標記的二抗，與抗原結合形成“抗體-抗原-酶標抗體"復合物。
顯色與定量?：TMB底物顯色(藍色→黃色)，450nm測OD值，濃度與顏色深淺正相關。
二、試劑盒組成?
預包被微孔板
標準品(如180、120、60、30、15 ng/L梯度)
HRP標記檢測抗體
樣本稀釋液、洗滌液、顯色液(TMB)、終止液
三、樣本處理要求?
樣本類型 處理方法 保存條件
血清? 3000g離心10min，取上清 -20℃避免凍融
血漿? EDTA/肝素抗凝，3000g離心30min -20℃保存
細胞上清? 3000g離心10min去除顆粒 -20℃分裝保存
注意?：避免溶血、脂血或NaN3干擾。
四、操作步驟?
標準品稀釋?：2倍梯度稀釋(如180→15 ng/L)，每孔50μL。
加樣?：樣本稀釋5倍后加樣(40μL稀釋液+10μL樣本)。
溫育?：37℃孵育30分鐘。
洗滌?：洗滌3-5次，去除未結合物質。
顯色與終止?：TMB避光顯色15分鐘，加終止液變黃。
五、結果計算?
以標準品濃度為橫坐標，OD值為縱坐標繪制標準曲線。
樣本濃度通過曲線方程計算，靈敏度通常≤0.68 pg/mL。
六、注意事項?
試劑保存?：2-8℃避光，有效期6個月。
避免污染?：移液器槍頭需更換，避免交叉污染。
顯色控制?：顯色時間過長可能導致假陽性。
注：以上資料僅供參考，如需進一步了解ELISA操作步驟或樣本處理方法，可參考試劑盒說明書。
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