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人表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒使用說明
BS-0182 人表皮生長因子(EGF)ELISA試劑盒
實驗原理
本試劑盒采用雙抗體夾心法ELISA技術，通過將純化的EGF捕獲抗體包被于微孔板形成固相抗體，依次加入樣本、標準品和HRP標記的檢測抗體，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物。經洗滌后加入TMB底物顯色，在HRP酶催化下產生藍色產物，酸化后轉為黃色，顏色深度與樣本中EGF濃度呈正相關，最終在450nm波長下測定OD值。
試劑盒組成與樣本處理
樣本類型?：適用于血清、血漿(EDTA/檸檬酸鹽/肝素抗凝)、組織勻漿、細胞培養上清及其他生物液體
樣本保存?：2-8℃可保存48小時，長期保存需-20℃或-70℃冷凍，避免反復凍融
樣本稀釋?：尿液至少需20倍稀釋(10μl樣本+190μl稀釋液)，血清/血漿可能需要預實驗確定稀釋倍數
標準品配制?：使用前加1ml蒸餾水配成20ng/ml溶液，通過系列倍比稀釋(從900μl稀釋液開始)建立標準曲線
檢測程序
加樣?：空白孔加50μl稀釋液，其余孔加50μl標準品或待測樣本，37℃孵育40分鐘
洗滌?：使用1×洗滌液充分洗滌4-6次，每孔350μl，每次浸泡1-2分鐘后拍干
加檢測抗體?：空白孔加100μl抗體稀釋液，其余孔加100μl生物素化抗體工作液，37℃孵育30分鐘
加SABC復合物?：每孔100μl，37℃孵育20分鐘
顯色?：加100μl TMB底物，37℃避光反應10-20分鐘(顯色時間需根據實際情況調整)
終止與讀數?：每孔加100μl終止液，30分鐘內在450nm波長測定OD值
技術參數
檢測范圍?：3.9-250pg/mL(典型范圍，不同品牌有差異)
靈敏度?：1.53-1.6pg/mL
重復性?：板內變異系數<10%，板間變異系數<10%
特異性?：與人EGF類似物無明顯交叉反應
注意事項
所有試劑使用前需恢復至室溫，液體組分充分混勻
嚴格避免泡沫產生和交叉污染，不同濃度樣本需更換槍頭
洗滌步驟對結果準確性至關重要，需確保洗滌充分
底物溶液變為藍色表明失效，不得使用
剩余板條應立即密封保存于干燥環境，建議1個月內用完
實驗廢棄物應按傳染物規范處置
建議標準品和樣本做雙孔檢測，每次實驗都需建立標準曲線
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