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?人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)使用說(shuō)明書(shū)主要包括試劑盒的用途、實(shí)驗(yàn)原理、試劑盒組成、實(shí)驗(yàn)步驟及注意事項(xiàng)等內(nèi)容?。以下是一份詳細(xì)的使用說(shuō)明書(shū)概述：
一、用途
人抗核周因子抗體(APF)ELISA試劑盒主要用于測(cè)定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中抗核周因子抗體(APF)的含量，適用于科研領(lǐng)域，不用于臨床診斷?。
二、實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用間接法測(cè)定標(biāo)本中人抗核周因子抗體(APF)水平。用純化的人核周因子抗原包被微孔板，制成固相抗原。往包被抗原的微孔中依次加入已知濃度的抗核周因子抗體(APF)標(biāo)準(zhǔn)品和未知濃度的待檢樣品，溫育后，加入生物素標(biāo)記的抗IgG抗體，再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，形成免疫復(fù)合物。經(jīng)過(guò)洗滌后加底物TMB顯色，TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的抗核周因子抗體(APF)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值)，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中人抗核周因子抗體(APF)濃度?。
三、試劑盒組成
試劑盒通常包含以下組件(具體組件可能因不同品牌或批次而有所差異)：
微孔板：包被有純化的人核周因子抗原
標(biāo)準(zhǔn)品：已知濃度的抗核周因子抗體(APF)標(biāo)準(zhǔn)品
樣本稀釋液
洗滌液
酶結(jié)合物(如HRP標(biāo)記的抗IgG抗體)
底物A、B
終止液
陰性、陽(yáng)性對(duì)照
說(shuō)明書(shū)?12四、實(shí)驗(yàn)步驟
從室溫平衡后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條密封放回4℃保存。
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，分別加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品和待測(cè)樣本。
加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體，封住反應(yīng)孔，溫育。
洗滌板條，去除未結(jié)合的抗體。
加入底物A、B，避光孵育。
加入終止液，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值?3。
五、注意事項(xiàng)
標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)，避免細(xì)菌污染和保存過(guò)久導(dǎo)致的假陽(yáng)性反應(yīng)。
凍結(jié)標(biāo)本溶解后應(yīng)充分混勻，避免氣泡。
渾濁或有沉淀的標(biāo)本應(yīng)先離心或過(guò)濾后再檢測(cè)。
反復(fù)凍融會(huì)使蛋白效價(jià)降低，如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存?。
請(qǐng)注意，具體的使用說(shuō)明書(shū)可能會(huì)因試劑盒品牌、批次等因素而有所差異，因此在使用前應(yīng)仔細(xì)閱讀隨試劑盒附帶的說(shuō)明書(shū)，并按照說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行操作。
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