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本生分享Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的技巧及注意事項(xiàng)
以下是ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵技巧與注意事項(xiàng)總結(jié)，本生結(jié)合操作規(guī)范與常見問題解決方案：
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備?
試劑平衡?
所有試劑需提前30分鐘室溫平衡(20-25℃)，避免溫度差異導(dǎo)致反應(yīng)不均?。
標(biāo)準(zhǔn)品溶解后需靜置10-30分鐘，避免渦旋震蕩導(dǎo)致蛋白變性?。
移液器校準(zhǔn)?
移液槍誤差需<2%，每年至少校準(zhǔn)一次，日常可用純水自查?。
加樣時選擇量程的35%-100%范圍(如20μL用20-200μL槍)?。
二、加樣操作技巧?
加樣規(guī)范?
槍頭懸空45°貼壁加樣，避免觸碰孔底或產(chǎn)生氣泡?。
每孔加樣量誤差需<5%，復(fù)孔加樣時間差≤5分鐘?。
順序控制?
加樣順序需一致(如標(biāo)準(zhǔn)品→樣本→抗體)，顯色時間需同步?。
漏加樣本需記錄，不可補(bǔ)加(避免交叉污染)?。
三、孵育與洗滌?
孵育條件?
37℃避光孵育(誤差±0.5℃)，震蕩孵育可提高反應(yīng)效率?。
封板膜需一次性使用，避免多次開閉導(dǎo)致污染?。
洗滌要點(diǎn)?
手工洗板需垂直拍干，機(jī)器洗板需檢查沖洗頭是否堵塞?。
洗滌次數(shù)≥3次(含0.05% Tween-20)，每次30秒?。
四、顯色與終止?
顯色控制?
TMB底物需全程避光，顯色時間20分鐘(最長不超過30分鐘)?。
顯色過強(qiáng)時需提前終止(最高標(biāo)準(zhǔn)品顯色達(dá)平臺期)?。
終止反應(yīng)?
終止液加入后5分鐘內(nèi)讀數(shù)，避免信號衰減?。
五、常見問題處理?
問題? ?解決方案?
高背景值 增加封閉時間(1-2小時)或洗滌次數(shù)?
標(biāo)準(zhǔn)曲線R2<0.98 檢查標(biāo)準(zhǔn)品稀釋是否充分混勻?
顯色不均 檢查底物是否避光保存或酶標(biāo)抗體失效?
注：不同品牌試劑盒參數(shù)可能差異較大，建議以實(shí)際說明書為準(zhǔn)。
注：僅供科研使用，以上資料供參考，如需具體產(chǎn)品說明請咨詢技術(shù)老師或品牌供應(yīng)商。
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