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使用ELISA檢測試劑盒進行試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以保證實驗結果的準確性。有時本底較高，說明有非特異性反應。
在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括：
固相載體的選擇：許多物質可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據此判明其吸附性能是否良好。
包被抗體(或抗原)的選擇：將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18～24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1～10μg/ml。
除此之外還要注意以下事項：
1.確定ELISA檢測試劑盒在有效期內;
2.仔細閱讀說明書;
3.按說明書確定所有試劑齊全(數量、體積);
4.標本制備要規范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備，盡量分裝做備份。短期內無法實驗者，注意低溫保存;
5.根據檢測標本數量確定所需試劑的量;
6.準備好所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等;
7.按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑。
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